PPF BIOMIM --- Projet NANOTOX ---

Démarche Scientifique :

L'approche biomimétique choisie dans ce projet consiste à exposer des cellules à des NPs dans des conditions similaires à celles rencontrées dans des cas physiologiques, i.e. en présence de biomolécules.

Ce projet pluridisciplinaire repose sur plusieurs compétences présentes à l’UTC pour sa réalisation:

- Caractérisations physico-chimiques des NPs (K. El Kirat, UMR 6600)

Les NPs seront caractérisées principalement par des mesures de DLS (Dynamic Light Scattering) et par mesure du potentiel zeta (pour déterminer leur stabilité en solution et leur charge de surface). La microscopie électronique servira aussi à localiser les NPs au sein d'échantillons biologiques. Ces caractérisations seront régulièrement effectuées sur les NPs seules et en association avec des biomolécules clés.

- Etudes biologiques (M Vayssade, MD Nagel, UMR 6600)

Les effets des NPs (modifiées ou non par des biomolécules) seront analysés sur des lignées cellulaires modèles (macrophages J774.2, pré-ostéoblastes MC3T3, fibroblastes L929). Nous étudierons la prolifération cellulaire (par numérations, tests d’exclusion au bleu trypan, tests LDH), la répartition des cellules dans le cycle cellulaire (par marquage à l’iodure de propidium), la morphologie des cellules cultivées en présence des NPs (par microscopie électronique à balayage environnemental), les éventuelles activations biochimiques (quantification de la sécrétion de nitrites, IL6, TNFa par des tests ELISA, en particulier pour les cellules L929 et J774.2), la mort cellulaire (quantification de l’apoptose par marquage Annexine V-FITC, mesure de l’activité des caspases, marquage de l’ADN fragmenté). La localisation subcellulaire des NPs dans les cellules sera évaluée par microscopie confocale.

Références

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